酵母蛋白表達

酵母蛋白表達

強耀生物科技有限公司已成功構建完整的各種蛋白表達技術平臺:包括原核蛋白表達與純化、酵母蛋白表達與純化、昆蟲細胞蛋白表達與純化、哺乳動物細胞蛋白表達與純化。根據客戶的需求,我們提供從基因合成,載體構建,基因表達,蛋白純化、檢測等一站式服務。為了保證蛋白純化的質量,強耀生物建立了嚴格的產品質控體系及一整套完善的客戶服務流程、保密制度以確保為客戶提供優質的產品及成熟的服務。 我們的蛋白質團隊在優化基因密碼子、表達載體的設計和構建、融合對象和標簽的選取、特定蛋白純化系統的選擇、蛋白生產工藝的優化等方面,擁有較多的經驗。可以滿足客戶個性化的需求。

酵母蛋白表達
重組蛋白表達與純化技術服務(P. Pichia表達系統)

強耀生物科技有限公司目前成熟的表達體系包括:原核表達系統(大腸桿菌 E. coli表達系統)、酵母表達系統(P. Pichia)表達建立了嚴格的產品質控體系及一整套完善的客戶服務流程、保密制度以確保為客戶提供優質的產品及成熟的服務。 技術服務按步驟收費,您可以選擇從以下任意一步開始提供服務或僅選擇其中的單獨一步,詳細價格請垂詢。

?酵母表達系統——步驟1. 目標基因亞克隆至酵母表達載體:
擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
測序驗證構建質粒的準確性。
可提供表達載體:pPICZα和pPIC9K
提供客戶:正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。
服務周期:1周
?酵母表達系統——步驟2. P. Pichia表達菌株電轉化:
酶切線性化表達質粒。
將表達質粒通過電轉化到高效的P. Pichia表達菌株中。
利用蛋白酶去除不需要的純化標簽(Tag),再純化獲得所需的目標蛋白(可選,構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點)。
通過PCR鑒定至少挑選5個陽性克隆。
可提供表達菌株:X33,GS115,KM71和SMD1168。
提供客戶:PCR陽性克隆及PCR結果報告。
時間:1周
? 酵母表達系統——步驟3. P. Pichia表達菌株篩選:
將5個陽性克隆于BMGY培養基中擴增,然后換至BMMY培養基中,并加入甲醇誘導表達目標蛋白。
SDS-PAGE電泳檢測培養上清中目標蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
如果培養上清中檢測不到表達,則通過將上清濃縮20倍作用再檢測,或通過Western-blot方法檢測目標蛋白表達(客戶需要提供相關抗體)。
提供客戶:任意一個客戶需要的陽性克隆菌株及表達篩選結果報告。
時間:2周
?酵母表達系統——步驟4. P. Pichia表達菌株表達優化:
挑選20個陽性克隆進行常規表達篩選,并對其中表達最好菌株優化表達條件。
對挑選出來的單克隆菌株,優化培養及誘導條件(培養基,菌體密度,甲醇濃度,誘導時間等),提高目標蛋白的表達量。
提供客戶:任意三個客戶需要的陽性克隆菌株及優化表達條件結果報告。
時間:2周
?酵母表達系統——步驟5.目標蛋白表達及純化:
搖瓶培養1L重組酵母菌,誘導表達目標蛋白。
通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
提供客戶:純化好的目標蛋白1~10mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上。
時間:2~3周
?酵母表達系統——步驟6.目標蛋白的再加工及詳細檢測
對生物學活性要求較高的純化后蛋白產品進行復性研究。
內毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。
通過HPLC,質譜等方法詳細檢測目標蛋白的質量。
服務內容:
1.復性研究:
利用多達18種不同復性緩沖液的體系,對目標蛋白進行小量復性試驗提供復性后樣品供客戶檢測。
可根據客戶要求,按照其中一種樣品的復性條件制備小量的復性蛋白。
可提供具體的復性緩沖液配方及復性工藝。
2.除內毒素
3.過濾除菌
4.凍干
5.HPLC檢測
6.質譜檢測
提供客戶:加工后的終產品及相關實驗和檢測報告。
時間:1~2周
?酵母表達系統——步驟7. 大規模制備
提供客戶:合格的目標蛋白及服務報告。
時間:協商
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